PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为了避免各个实验区域间的可能性,通风方式应为机械通风,不应自然通风,且不宜使用循环风。同时要严格控制送、排风比例以保证各试验区的压力要求。PCR实验室的空气流向应按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行,防止扩增的产物顺空气气流进入扩增前的区域。可选择负压排风装置,区域相对于相邻区域压不小于-10Pa。也可通过安装排气扇或者其他方式实现。PCR实验室要求温度18~26℃,相对湿度30%~70%。
需要注意以下问题:
实验室使用的基因扩增仪,荧光定量PCR仪都是高精度仪器。一旦仪器出现一些温度或者检测上的小偏差,则很可能对实验结果产生较大的影响。因此,学会日常保养和维护是尤为重要的。
1、仪器安置
仪器应安放在湿度较低、灰尘较少并远离水源和热源的地方,无腐蚀性气体或强磁场干扰。
环境温度建议在18~35℃之间。仪器之间应保持50cm 以上距离,降低仪器之间的影响。
2、样品台、热盖定期清洁
用95%乙醇配合棉签、无尘布等工具,清洁样品台。之后运行PCR仪,设定保持温度为50℃,约5~10min,让残余液体挥发去除。另外,热盖也应该用酒精或纯水定期清洗,确保热盖清洁,温控性能良好。对于荧光定量PCR,清洁样品台和热盖的同时,去除灰尘等杂物,保证光路清洁,降低信号干扰。
3. 使用前预热
老款的PCR仪的性能比不上新款仪器,使用前需要进行预热,不仅对仪器维护有好处,还能节约实验时间。新款的仪器升温快,但还是建议能在进行实验前预热2min,这样可以有效延长仪器的使用寿命。
4. 定期运行维护
1.PCR仪器需要定期检测,视制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的,当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1~2℃时,可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。
3.PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制,要求越短越好,当PCR仪的降温过程超过60s,就应该检查仪器的制冷系统,对风冷制冷的PCR仪要较地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。
4.一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时,不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件,必要时要请人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。
故障现象一:分机听见主机声音,但主机听不见分机声音。
分析与维修:首先划分为两种情况:
(1)所有分机均可听见主机声音,但主机连一台分机的声音都听不到;
(2)所有分机都可听见主机声音,但主机只有某台分机声音听不见。
通过试验,判断故障到底属于上面两种情况中的哪一种,如果为种情况,就是主机话筒或话筒线故障,把话筒线两端的插头从卡座中拨出,再重新插回,仍然没有声音,然后打开话筒外壳,观察里面的连线时发现内部磁电式的一条连接导线从焊接处脱出,焊回该条导线后即可听见声音;
如果为第二种情况,则有三种可能引起故障的原因:
(1)话筒内部连线断裂或损坏;
(2)分机麦克风(MIC)坏;
(3)分机音频放大三极管Q4(型号:9014)或Q5型号:9013)损坏。
先打开话筒外壳,检查发现导线连接牢固,用万用表测量亦正常,把故障分机与临近病房的电源插座和按钮(内置MIC插座相连,故障依旧,说明与分机MIC无关,焊出电路板上音频放大管Q4、Q5检查,发现Q4c、e 极间击穿,更换Q4,恢复正常。
故障现象二:主机听见分机声音,分机听不见主机声音。
分析与维修:该故障也可分为两种情况:
(1)所有分机听不见主机声音;
(2)单台分机听不见主机声音。
种情况故障点在主机上,着重检查主机电话机及连线,拆开话筒,可见话筒内的麦克风焊接处断开,用烙铁将断线焊牢;
第二种情况故障出在分机上,着重检查电路板上的扬声器控制继电器Jl,在Jl线圈两端加12VDC电压,测量JK触点,发现触点接触不良,更换新的继电器,故障消失。
故障现象三:按下分机呼叫按钮,红灯不亮。
分析与维修:分机盒上的红色指示灯代表正在呼叫。按复位钮,红灯亮,表明指示灯本身无问题,用万用表测量呼叫按钮薄膜开关,发现开关断开,肉眼可见开关有碳化痕迹,可以肯定开关己坏,更换新的薄膜开关,机械恢复正常。