山东康德莱净化工程有限公司

山东康德莱净化更-PCR核酸检测实验室净化方案

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PCR实验室中的气溶胶污染来源于两个过程:样本制备过程和PCR扩增过程。


在样本制备过程中,样本液体面与空气摩擦就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管、开盖时、吸样时及加样器的反复吸样都可能形成气溶胶而污染;PCR扩增过程可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。



如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化扩增产物就会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,造成严重的实验室污染,导致检验样本出现假阳性结果,使临床做出错误的判断和决策,进而引发后续一系列的事故和恐慌。









PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于PCR技术假阳性率太高,只要有微量病原体存在就可得到阳性结果,这并不能作为诊断依据,只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此,对模板准确定量显得特别重要,应用荧光技术PCR就能够快速、准确地得到结果。对于解决学检测的“窗口期”问题,判断疾病是否处于隐性或亚临床状态,以及检测不能判定是现症还是既往时,均可利用PCR进行确定。


示例:新型冠状病毒核酸检测。


方法学:荧光PCR法。


用途:用于体外定性检测新型冠状病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要进行新型冠状病毒诊断或鉴别。




检测基因:新型冠状病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。


标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。


检测流程:


(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)→(2)样本的灭活(56℃灭活30分钟)→(3)样本的核酸提取(手工、核酸提取仪)→(4)PCR体系的配制和模板加样→(5)上机检测及结果分析→(6)检测后的消毒。


其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。


适合开展的医院和:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。

辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景,并非越苛刻越好,需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。


1.离心管


(1)渗漏密闭性:将n个离心管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。


(2)离心密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入离心机,10000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。


(3)热密闭性:将n个离心管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入金属浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再进行称重,离心管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。


(4)冷密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。




(5)污染物质检:将n个离心管分别加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,吸取纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。


(6)抑制物质检:将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。